ИССЛЕДОВАНИЕ БИОСИНТЕЗА ИНДИВИДУАЛЬНЫХ АНТИГЕНОВ

В настоящее время единственным общим методом исследования биосинтеза индивидуальных антигенных веществ является метод осаждения исследуемого антигена соответствующими антителами с последующим анализом радиоактивности преципитата. Наилучший вариант этого метода — радиоаутография иммунофореграмм, содержащих меченые антигены {13, 19}. Метод характеризуется специфичностью и высокой разрешающей способностью, хотя и не лишен некоторых недостатков и ограничений. Это, во-первых, невозможность количественной оценки данных, поскольку неизвестно, какая доля антигена, взятого для анализа, включается в состав линии преципитата на иммунофоре-грамме, и, во-вторых, сравнительно малая чувствительность метода, особенно при работе с немечеными «носителями», когда имеет место высокое специфическое разведение меченых антигенов. Вследствие этого обычные экспозиции при радиоаутографии иммунофореграмм сывороточных белков составляют 2—3 недели, не считая 2—3-суточной предварительной обработки препаратов— тщательного отмывания и высушивания.

Использование аналитической иммунофильтрации позволяет обойти обе трудности и проводить количественную оценку включения меченых аминокислот в индивидуальный антиген при увеличении чувствительности метода в несколько раз {2}. Метод состоит из двух этапов: получения зоны исследуемого антигена посредством иммунофильтрации в сочетании с простым электрофорезом (см. предыдущий раздел) и последующей радиоаутографии этой зоны. Обработка на денситометре электрофореграм-мы и радиоаутографа, полученного с нее, дает принципиальную возможность количественной оценки данных. Чувствительность метода в несколько раз больше, чем описанного выше.

Этот вариант метода был разработан нами применительно к анализу биосинтеза сывороточного альбумина и ccf-глобулина в организме новорожденных мышей. Ниже приведены сравнительные данные, полученные методами радиоаутографии иммунофореграмм и аналитической иммунофильтрации.

Анализ проводили с сыворотками новорожденных мышей, получивших за 3 часа до обескровливания подкожную инъекцию —1,5 цс на 1 г веса 2—С-глицина с удельной активностью 3 рс/мг.

http://medicadverts.ru/ - медицинские советы Марии Струбциновой